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服务简介

背景:相较传统抗体,驼源抗体具有较高的亲和力,易于重组表达制备,易人源化,易与其它靶点抗体组合,在疾病诊断和治疗领域有着很大的应用价值和发展前景。三优隆重推出磁阵列羊驼单克隆抗体定制服务。


方法:磁阵列羊驼单克隆抗体制备技术(Magnetic & Immunization & Tandem,MIT)整合了“羊驼免疫、阵列化噬菌体抗体库构建、磁珠高通量筛选、CHO真核细胞重组表达”四种技术,并匹配了全面的理化及生化分析进行筛选。


优势:仅需3-6周(从羊驼免疫结束开始)即可获得特异性好、亲和力高、序列明确,并经真核表达验证的驼单克隆抗体。


案例:自2016年推出该服务以来,截止2021年12月,三优生物通过羊驼单抗制备平台已经完成了上百个项目;针对每个靶点,通常可获得40-60个序列独特、特异性好、亲和力经验证的先导抗体克隆。

服务简介 背景:相较传统抗体,驼源抗体具有较高的亲和力,易于重组表达制备,易人源化,易与其它靶点抗体组合,在疾病诊断和治疗领域有着很大的应用价值和发展前景。三优隆重推出MIT驼重组单抗定制服务。方法:MIT羊驼重组单抗制备技术整合了“羊驼免疫、阵列化噬菌体抗体库构建、磁珠高通量筛选、CHO真核细胞重组表达”四种技术,并匹配了全面的理化及生化分析进行筛选。 优势:仅需3-6周(从羊驼免疫结束开始)即可获得特异性好、亲和力高、序列明确、并经真核表达验证的驼单克隆抗体。 案例:自2016年推出该服务以来,截止2021年12月,三优生物通过羊驼单抗制备平台已经完成了上百个项目;针对每个靶点,通常可获得40-60个序列独特、特异性好、亲和力经验证的先导抗体克隆。服务内容 服务名称 服务内容 客户提供 交付物 周期 MIT羊驼重组 单抗定制服务 羊驼免疫 免疫库构建 高通量筛选 真核表达验证 靶点名称、或靶点抗原、 或细胞株 交付物: 1. 数十个先导抗体分子 2. 按需提供抗体小样 交付标准: 1. 抗体亲和力排序 2. 优选分子经亲和 动力学或FACS验证 约4 个月 驼源抗体人源化 人源化设计 真核表达验证 驼源抗体序列、 靶点蛋白和对照抗体、 鉴定用细胞株等 人源化序列、蛋白、 质粒、检测报告 4-6 周 服务亮点 1. 抗体序列明确,减少冗余筛选工作 本服务采用基因工程和噬菌体展示技术,可直接获得抗体的基因序列,以减少不必要的筛选工作。 2. 交付数十至上百个先导抗体分子 本服务采用多组引物阵列式建库方法及多种类筛库策略,单一靶点可获得数十至上百个候选分子。 3. 高难度靶点、隐蔽表位全覆盖 针对G蛋白偶联受体、离子通道、多次跨膜蛋白等高难度靶点可获得大量抗体分子,覆盖蛋白大部分表位。 4. 真核表达,细胞水平活性验证,保证交付分子成药性 本服务获得的分子会经过真核水平构建表达,对抗体的理化性质以及细胞功能做全面的检测,保证交付的先导抗体具有较好的成药性。 服务特性 1. 先导抗体数量通常可达数十个 通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选获得的纳米抗体先导分子数量较多。通过10个靶点对MIT驼库进行验证,共获得475个具有独特序列的抗体克隆,克隆数中值为 38个。 Fig. 1 Statistics of Binder amount/project 2. 先导抗体亲和力高 通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子候选分子亲和力高,可达pM水平。对所得单域抗体克隆构建全长IgG后的亲和力测定情况如下所示。 Fig. 2和Fig. 3中的抗体来自两个不同的项目,由图可知,这两个项目均可获得多个亲和力与对照抗体相当或显著优于对照抗体的分子。 Fig. 2 Affinity ranking assay of SD10 Fig. 3 Affinity ranking assay of SD41 3. 成药性相关参数 MIT羊驼重组单抗定制服务获得的分子构建全长后,对抗体的表达量,以及抗体的理化特性进行分析。如Table 1所示,展示了全面的成药性评价体系,包括纯度及浓度测定,一级结构分析和亲和力及亲和动力学等多个维度。 Table 1 Drugdevelopability of Antibody from MITA 类别 检测内容 检测方法 纯度及浓度测定 纯度鉴定 SDS-PAGE/SEC/CE-SDS 纯度及浓度测定 浓度鉴定 Protein A-HPLC/UV280 一级结构分析 分子量分析 LC/MS 一级结构分析 电点 iCIEF 一级结构分析 疏水性鉴定 HIC-HPLC 一级结构分析 电荷异质性测定 CEX 一级结构分析 肽图分析 LC-UV-MS/MS 一级结构分析 N糖谱分析 LC/MS 亲和力及亲和动力学 亲和力检测 ELISA 亲和力及亲和动力学 亲和动力学检测 BLI/SPR 亲和力及亲和动力学 细胞结合检测(如有) FACS 案例展示 1. 细胞水平结合分析 通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子候选分子大多具有细胞水平活性和阻断活性。Fig. 4展示了采用FACS分析抗体与细胞表面蛋白结合活性的一个案例项目。由图可知,全部先导抗体分子均展现了良好的细胞水平的结合活性。 Fig. 4 Binding affinity determination by FACS 2. 体外药效验证 通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子体外药效优秀,甚至优于对照抗体。MLR实验中,使用不同donor的CD4+T细胞及DC细胞共培养,抗PD-L1的抗体可有效阻断PD1/PD-L1抑制信号,活化T细胞,促进细胞因子的分泌。如图Fig. 5所示,经PD-L1候选抗体(A1, A2)处理后,细胞的IL-2分泌量均显著增加,表明两者具有与已上市的对照抗体药物高度相似的生物学活性。 Fig. 5 In vitro evaluation of SD10 sdAb candidates by MLR 3. 体内药效验证 通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选出的纳米抗体候选分子体内药效优秀。各靶点候选分子在不同小鼠CDX模型的体内抗肿瘤药效验证案例如Fig. 6、Fig. 7、Fig. 8所示。分为治疗组和对照组,每周给药两次,连续给药三周。结果显示各靶点候选抗体在不同剂量下均显示出和对照抗体相同,甚至优于对照抗体的抗肿瘤效果。 Fig. 6 Tumor growth inhibition Fig. 7 Tumor growth inhibition Fig. 8 Tumor growth inhibition 4. 同类型代表项目进展 Table 3 同类型代表项目进展 项目号 靶点 适应症 项目难点 分子形式 库来源 进展 未披露 NCOV 新冠 广谱中和活性 双抗 羊驼免疫库 IND中 未披露 CL18 消化道肿瘤 多次跨摸 纳米抗体 羊驼免疫库 IND中 未披露 PL1/H2/VF 消化道肿瘤 ADCC 三抗 羊驼免疫库 +羊驼免疫库 +Biosimilars 生产细胞株 未披露 TR2/C4 乳腺癌,肺癌 TNFR2肝脏毒性 双抗 羊驼免疫库 +羊驼免疫库 体外药效 未披露 TR2/C18.2 实体瘤 TNFR2肝脏毒性 双抗 羊驼免疫库 +羊驼免疫库 体外药效 未披露 TR2/PL1 实体瘤 双重免疫抑制解除 双抗 羊驼免疫库 +羊驼免疫库 体外药效 LK003 未披露 实体瘤 免疫调控相关靶点 全长抗体 羊驼免疫库 体外药效 未披露 I17A/F 类风湿关节炎 中和型双特异抗体 双抗 羊驼免疫库 +羊驼免疫库 体外药效 DJ001 未披露 AMD,DME 阻断功能抗体 全长抗体 羊驼免疫库 体外药效 DJ002 未披露 AMD,DME 阻断功能抗体 全长抗体 羊驼免疫库 体外药效 附加服务 子服务 骆驼、羊驼免疫服务 三优生物公司核心研发团队成员拥有多年的抗体定制生产经验,由客户提供抗原(细胞)或抗原序列,三优帮助完成驼类免疫服务,满足了客户多种品系、多种免疫方案、多种免疫途径的各类要求。公司建有设有羊驼和骆驼饲养基地。目前有几十只健康适龄、免疫背景清晰的羊驼和骆驼,并配备了专业的、创新的免疫服务平台。 多样化的羊驼免疫方式 多种免疫方案:根据抗原特性进行皮下多点、多途径(抗原或细胞)、多种属(人鼠猴等)免疫原交叉免疫。 案例展示 羊驼免疫后血清学效价高 Fig. 6 展示的是免疫后羊驼血清学效价的数据。如图所示,该项目2只羊驼(A,B)免疫后的 IgG 血清学效价约为256k,达到建库标准,甚至为理论效价指标的8倍。 Fig. 6 Serological titer assay of alpaca after immunization

服务内容

服务名称

服务详情

客户提供

交付物及标准

周期

磁阵列羊驼单克隆抗体定制服务

1. 羊驼免疫

2. 免疫库构建

3. 高通量筛选

4. 真核表达验证

靶点名称、或靶点抗原、或细胞株

交付物:

1. 数十个先导抗体分子

2. 按需提供抗体小样

交付标准:

1. 抗体亲和力排序

2. 优选分子经亲和动力学或FACS验证

约4 个月

驼源抗体人源化

1. 人源化设计

2. 真核表达验证

驼源抗体序列、靶点蛋白和对照抗体、鉴定用细胞株等

人源化序列、蛋白、质粒、检测报告

4-6 周


服务亮点
  • 1. 抗体序列明确,减少冗余筛选工作
    1. 本服务采用基因工程和噬菌体展示技术,可直接获得抗体的基因序列,以减少不必要的筛选工作。
  • 2. 交付数十至上百个先导抗体分子
    1. 本服务采用多组引物阵列式建库方法及多种类筛库策略,单一靶点可获得数十至上百个候选分子。
  • 3. 高难度靶点、隐蔽表位全覆盖
    1. 针对G蛋白偶联受体、离子通道、多次跨膜蛋白等高难度靶点可获得大量抗体分子,覆盖蛋白大部分表位。
  • 4. 真核表达,细胞水平活性验证,保证交付分子成药性
    1. 本服务获得的分子会经过真核水平构建表达,对抗体的理化性质以及细胞功能做全面的检测,保证交付的先导抗体具有较好的成药性。

服务特性
1. 先导抗体数量通常可达数十个

通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选获得的纳米抗体先导分子数量较多。通过10个靶点对MIT驼库进行验证,共获得475个具有独特序列的抗体克隆,克隆数中值为38个。


Fig. 1 Statistics of Binder amount/project

2. 先导抗体亲和力高

通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子候选分子亲和力高,可达pM水平。对所得单域抗体克隆构建全长IgG后的亲和力测定情况如下所示。 Fig. 2和Fig. 3中的抗体来自两个不同的项目,由图可知,这两个项目均可获得多个亲和力与对照抗体相当或显著优于对照抗体的分子。

Fig. 2 Affinity ranking assay of SD10


Fig. 3 Affinity ranking assay of SD41

3. 成药性相关参数

MIT羊驼单克隆抗体定制服务获得的分子构建全长后,对抗体的表达量,以及抗体的理化特性进行分析。如Table 1所示,展示了全面的成药性评价体系,包括纯度及浓度测定,一级结构分析和亲和力及亲和动力学等多个维度。


Table 1 Drugdevelopability of Antibody from MITA

类别

检测内容

检测方法

纯度及浓度测定

纯度鉴定

SDS-PAGE/SEC/CE-SDS

纯度及浓度测定

浓度鉴定

Protein A-HPLC/UV280

一级结构分析

分子量分析

LC/MS

一级结构分析

电点

iCIEF

一级结构分析

疏水性鉴定

HIC-HPLC

一级结构分析

电荷异质性测定

CEX

一级结构分析

肽图分析

LC-UV-MS/MS

一级结构分析

N糖谱分析

LC/MS

亲和力及亲和动力学

亲和力检测

ELISA

亲和力及亲和动力学

亲和动力学检测

BLI/SPR

亲和力及亲和动力学

细胞结合检测(如有)

FACS


案例展示
1. 细胞水平结合分析

通过三优MIT羊驼单克隆抗体定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子大多具有细胞水平结合活性和阻断活性。Fig. 4展示了采用FACS分析抗体与细胞表面蛋白结合活性的一个案例项目。由图可知,全部先导抗体分子均展现了良好的细胞水平的结合活性。

Fig. 4 Binding affinity determination by FACS
2. 体外药效验证

通过三优MIT羊驼单克隆抗体定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子体外药效优秀,甚至优于对照抗体。MLR实验中,使用不同供体的CD4+T细胞及DC细胞共培养,抗PD-L1的抗体可有效阻断PD-1/PD-L1抑制信号,活化T细胞,促进细胞因子的分泌。如Fig. 5所示,经PD-L1候选抗体(A1,A2)处理后,细胞的IL-2分泌量均显著增加,表明两者具有与已上市的对照抗体药物高度相似的生物学活性。

Fig. 5 In vitro evaluation of SD10 sdAb candidates by MLR

3. 体内药效验证

通过三优MIT羊驼单克隆抗体定制服务筛选出的纳米抗体候选分子体内药效优秀。各靶点候选分子在不同小鼠CDX模型的体内抗肿瘤药效验证案例如Fig. 6、Fig. 7、Fig. 8所示。分为治疗组和对照组,每周给药两次,连续给药三周。结果显示各靶点候选抗体在不同剂量下均显示出和对照抗体相同,甚至优于对照抗体的抗肿瘤效果。


Fig. 6 Tumor growth inhibition


Fig. 7 Tumor growth inhibition


Fig. 8 Tumor growth inhibition

4. 同类型代表项目进展


Table 2 同类型代表项目进展

项目号

靶点

适应症

项目难点

分子形式

库来源

进展

SYZJ002

未披露

新冠

广谱中和活性

双抗

羊驼免疫库

IND中

SY11-sAb

未披露

消化道肿瘤

多次跨摸

纳米抗体

羊驼免疫库

IND中

SYDX-P003

未披露

消化道肿瘤

ADCC

三抗

羊驼免疫库+

羊驼免疫库+

Biosimilars

生产细胞株

SYDX-B019

未披露

乳腺癌,肺癌

TNFR2肝脏毒性

双抗

羊驼免疫库+

羊驼免疫库

体外药效

SYDX-B020

未披露

实体瘤

TNFR2肝脏毒性

双抗

羊驼免疫库+

羊驼免疫库

体外药效

SYDX-B022

未披露

实体瘤

双重免疫抑制解除

双抗

羊驼免疫库+

羊驼免疫库

体外药效

LK003

未披露

实体瘤

免疫调控相关靶点

全长抗体

羊驼免疫库

体外药效

SYDX-B014

未披露

类风湿关节炎

中和型双特异抗体

双抗

羊驼免疫库+

羊驼免疫库

体外药效

DJ001

未披露

AMD,DME

阻断功能抗体

全长抗体

羊驼免疫库

体外药效

DJ002

未披露

AMD,DME

阻断功能抗体

全长抗体

羊驼免疫库

体外药效


附加服务
子服务 骆驼、羊驼免疫服务

三优生物公司核心研发团队成员拥有多年的抗体定制生产经验,由客户提供抗原(细胞)或抗原序列,三优帮助完成驼类免疫服务,满足了客户多种品系、多种免疫方案、多种免疫途径的各类要求。公司建有设有羊驼和骆驼饲养基地。目前有几十只健康适龄、免疫背景清晰的羊驼和骆驼,并配备了专业的、创新的免疫服务平台。


多样化的羊驼免疫方式

多种免疫方案:根据抗原特性进行皮下多点、多途径(抗原或细胞)、多种属(人鼠猴等)免疫原交叉免疫。


案例展示

羊驼免疫后血清学效价高

Fig. 9展示的是免疫后羊驼血清学效价的数据。如图所示,该项目2只羊驼(A,B)免疫后的IgG血清学效价约为256 k,达到建库标准,甚至为理论效价指标的8倍。


Fig. 9 Serological titer assay of alpaca after immunization