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服务简介

背景:抗体药物分子量大,结构复杂,存在翻译后修饰(PTM),同时抗体药物来自于活细胞,包含多种与产品和工艺相关的杂质。针对蛋白药物的复杂性,需要从多个角度使用不同方法对样品进行分析,控制样品结构,纯度,活性及杂质。


方法:从浓度、含量、纯度分析、翻译后修饰、一级结构和高级结构、残留检测、活性检测等各个维度对抗体展开分析。


优势:平台分析表征全面多样,质量管理体系全面,仪器设备国际领先,团队经验丰富,确保检测结果准确、稳定、合规、可追溯。


案例:三优生物经过多年的技术沉淀和升级,已建立起单抗,多抗和融合蛋白的多维表征分析平台。累积服务项目数百个,涉及早期研发,小试工艺开发等各个药物研发阶段。按药典建立了完善的标准体系,通过准确且可重复的表征方法对药物生产提供支持和指导。

服务简介 背景:抗体药物分子量大,结构复杂,存在的翻译后修饰(PTM),抗体药物来自于活细胞,包含多种与产品和工艺相关的杂质。针对蛋白药物的复杂性,需要从多个角度使用不同方法对样品进行分析,控制样品结构,纯度,活性及杂质。 方法:从浓度、含量、纯度分析、翻译后修饰一级结构和高级结构、残留检测、活性检测等各个维度对抗体展开分析。 优势:平台分析表征全面多样,质量管理体系全面,仪器设备国际领先,团队经验丰富,确保检测结果准确、稳定、合规、可追溯。 案例:三优生物经过多年的技术沉淀和升级,已建立起单抗,多抗和融合蛋白的多维表征分析平台。累积服务项目数百个,涉及早期研发,小试工艺开发等各个药物研发阶段。按药典建立了完善的标准体系,通过准确且可重复的表征方法对药物生产提供支持和指导。 服务内容 检测类别 检测内容 检测方法 客户提供 交付物及标准 周期 浓度、含量及纯度鉴定 蛋白浓度 ProA-HPLC、UV280 样品 实验报告 1-2 天 浓度、含量及纯度鉴定 蛋白纯度  SDS-PAGE、SEC、 CE-SDS 样品 实验报告 1-2 天 浓度、含量及纯度鉴定 蛋白电荷异构体 CEX、iCIEF 样品 实验报告 3-7 天 浓度、含量及纯度鉴定 蛋白等电点 iCIEF 样品 实验报告 1-2 天 一级结构分析 蛋白分子量 LC-MS 样品 实验报告 2-4 周 一级结构分析 肽谱分析 LC-MS、MS 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 N糖谱分析 LC-MS 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 糖基化位点分析 LC-MS、MS 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 寡糖链分析 UPLC-FLD、MS 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 唾液酸含量 UPLC-FLD 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 脱酰胺、氧化、N端环化等 LC-MS、MS 样品 实验报告 2-4 周 高级结构分析 二硫键分析 LC-MS、MS 样品 实验报告 2-4 周 高级结构分析 热稳定性 DSF 样品 实验报告 2-4 周 生物学活性检测 亲和动力学分析 BLI、SPR 样品 实验报告 1-2 周 生物学活性检测 抗体结合分析 ELISA 样品 实验报告 1-2 周 生物学活性检测 抗体阻断分析 ELISA 样品 实验报告 1-2 周 生物学活性检测 抗体结合表位分析 BLI、ELISA 样品 实验报告 1-2 周 杂质检测 Protein A 残留检测 ELISA 样品 实验报告 1-2 天 杂质检测 宿主蛋白残留检测 ELISA 样品 实验报告 1-2 天 杂质检测 宿主DNA残留检测 ELISA 样品 实验报告 1-2 天 服务亮点 1. 表征分析,全面多样 分析表征涵盖浓度、含量、纯度分析、翻译后修饰一级结构和高级结构、残留检测、活性检测等各个维度。 2. 质量管理,全面严格 平台建立了全面、严格的质量管理体系,确保分析结果的合规性、真实性、可靠性和可追溯性。 3. 仪器设备,国际先进 平台拥有国际先进的仪器设备和系统规范化的操作方法,确保表征分析结果准确高、稳定性好。 4. 团队成员,经验丰富 团队经已完成数百个相关分析项目,拥有丰富的单抗、多抗、融合蛋白等不同类型分子的表征分析经验。 服务特性 1.多维理化表征分析检测项目种类齐全 三优生物多维理化表征分析平台拥有丰富的检测项目和检测手法,涵盖基础的浓度、含量、纯度分析、一级结构和高级结构、残留检测。 2.业内领先的仪器平台 三优生物的表征分析平台集成了一系列行业内先进的检测设备,致力于保障精准稳定的表征检测分析结果。 ・ ProteinSimple Maurice ・ Waters ACQUITY UPLC-H-Class PLUS ・ Biacore T200 ・ ProbeLife Gator ・ Agilent 1260 HPLC ・ ABI 7500 Fast RT-PCR、 ・ MD SpectraMax iD3 ・ MD AquaMax 4000 ・ BioHandler NPS9100 workstation 案例展示 1. 浓度测定(Protein A-HPLC) 如Fig. 1 所示,通过ProteinA-HPLC法绘制对照抗体IgG1的标准曲线,峰型呈正态分布,峰面积与浓度线性R2为0.995,线性良好,为抗体蛋白浓度测定提供了快速的数据支持。 Fig. 1 对照抗体标准曲线 色谱柱 MAbPac Protein A 规格 4×35 mm 流动相A 50 mM 磷酸盐缓冲液,150 mM 氯化钠,pH 7.4 流动相B 50 mM 磷酸盐缓冲液,150 mM 氯化钠,pH 2.5 流速 2.0 mL/min 进样量 15 µL 温度 25 ℃ 检测波长 280 nm 仪器 Agilent HPLC 1260 2. 蛋白含量测定(UV280) 如Table 1 所示,通过商品化的BSA确认仪器的系统适用性,再将待测样品利妥昔单抗(Rituximab)稀释至紫外分光光度计的吸光度范围进行吸光度值测定(n=3)。最后通过浓度与吸光度,稀释倍数和消光系数间的关系(Con.=A280×DF/ε )计算得到待测样品的浓度,为蛋白浓度测定提供了准确的数据支持。 Table 1 待测样品的吸光度测定记录 Sample ID User Name Date and Time Comments Triplicates 280 nm Avg Abs 280 nm Sample1 HMM1 3/25/2021 4:41:47 PM BSA-b 0.675 0.676 0.676 0.676 Sample2 HMM1 3/25/2021 4:42:30 PM BSA-c 0.695 0.695 0.695 0.695 Sample3 HMM1 3/25/2021 4:43:21 PM BSA-d 0.677 0.678 0.679 0.678 Sample4 HMM1 3/25/2021 4:52:35 PM Rituximab-B 0.661 0.661 0.661 0.661 Sample5 HMM1 3/25/2021 4:53:30 PM Rituximab-C 0.651 0.650 0.650 0.650 Sample6 HMM1 3/25/2021 4:54:16 PM Rituximab-D 0.658 0.658 0.658 0.658 3.1. 纯度分析(SDS-PAGE) 如Fig. 2 所示,SDS-PAGE能够准确确定分子量大小及主条带纯度,达到纯度分析的目的。 Fig. 2 SDS-PAGE电泳图谱 3.2. 纯度鉴定(CE-SDS) 如Fig. 3、Fig. 4 所示, CE-SDS能够准确定量分子大小分布及主峰纯度, 对抗体的碎片有着更高的分辨率,为抗体蛋白纯度鉴定提供更准确的数据支持。 Fig. 3 非还原 CE-SDS图谱 Fig. 4 还原 CE-SDS图谱 3.3. 纯度分析(SEC-HPLC) 如Fig. 5 所示,SEC可基于溶液中蛋白质的流体动力学尺寸进行分离,能准确分离出Sample1的聚体含量4.21%,单体含量95.79%,达到聚体分析的目的,为抗体蛋白纯度鉴定提供精准的数据支持。 Fig. 5 Sample 1 SEC检测图谱 色谱柱 XBridge BEH 200Å 规格 SEC 3.5 µm (300×7.8 mm) 流动相 150 mmol/L,PB pH 7.4 流速 0.8 mL/min 进样量 100 µg 温度 20 ℃ 检测波长 280 nm 仪器 Agilent HPLC 1260 4. 电荷异质性 如Fig. 6 所示,CEX pH梯度法能准确分离出上市单抗利妥昔的酸性变异体含量13.16%,主成分含量60.56%,碱性变异体含量26.271%,与文献报道一致,为抗体蛋白电荷变异体分析提供精准的数据支持。 Fig. 6 Rituxan CEX图谱 5. 等电点分析 如Fig. 7 所示,iCIEF能够准确检测出上市抗体药物曲妥珠的pI值为8.97,与上市抗体药提供的pI值一致,表明此方法稳定可靠,为抗体蛋白pI值分析提供准确的数据支持。 Fig. 7 曲妥珠pI值检测 6. 分子量检测 如Fig. 8 所示,LC-MS可获得蛋白多肽类药物A的精确分子量。 Fig. 8 药物A的质谱图 糖型 理论分子量 M+G0F+G0F 148220.0 M+G0F+G1F 148383.0 M+G1F+G1F 148545.0 M+G1F+G2F 148707.0 M+G2F+G2F 148868.0 7. 肽谱分析 如Fig. 9 所示, 该蛋白样品的单酶切肽谱覆盖率已达98.4%,3 种酶切肽谱进行重叠分析, 肽谱覆盖率可达100%,可以很理想的准确确证蛋白的氨基酸序列。 Fig. 9 肽段覆盖率 8. 肽图 如Fig. 10 及Table 2 所示, 质量肽图检查法可获得该蛋白样品的肽段修饰、肽段序列、价态、平均分子量、响应值等氨基酸序列的全部信息。 Fig. 10 Trypsin酶解产物紫外色谱标注图谱 Table 2 Trypsin酶解产物CDR肽段信息(部分) CDR肽段 肽段序列 保留时间(min) 批号1 批号2 LCDR3(2) TFGQGTK 14.37 14.35 LCDR1(1) VTITCR 20.88 20.85 HCDR1(1) LSCAASGFR 27.36 27.34 HCDR2(1) APEWVSDINTR 42.93 42.89 9. N-糖型 抗体药物A糖型图谱如Fig. 11 所示,糖型种类和相对数量清晰,与文献报道的糖谱一致,表明此方法稳定可靠,可用于产品一致性和稳定性评价。 Fig. 11 荧光检测器(HPLC / FLD)检测的N糖图谱 10. 唾液酸 如Fig. 12 所示该方法可以准确的检测出单抗阿达木中唾液酸(Neu5Ac,NANA)类型和含量,保留时间与阳性对照一致,表明此方法稳定可靠。 Fig. 12 唾液酸分析 色谱柱 Waters BEH C18 规格 (2.1 mm×100 mm)1.7 µm 流动相 甲醇:乙腈:水(7:9:84) 流速 0.25 mL/min 进样量 3 µL 温度 30 ℃ 检测波长 激发波长373 nm,吸收波长448 nm 仪器 Waters ACQUITY UPLC H-Class 11. Tm值检测 如Fig. 13,Fig. 14 所示,DSF能够准确检测出已上市抗体药物A的Tm1值为69.3℃,Tm2值为81.6℃,该组温度与文献报道的Tm值一致,表明此方法稳定可靠。 Fig. 13 药物A的荧光曲线 Fig. 14 药物A的一阶导数曲线 12. 亲和动力学分析 利用BLI技术,可以分析候选抗体与抗原的结合能力,进而评价其成药性。Fig. 15,16 展示了抗体与抗原结合活性分析的案例。由图可知, 抗体1(Ab1)与抗原的亲和力要比抗体2(Ab2)高一个数量级。 Fig. 15 抗体1与抗原结合(BLI) Fig. 16 抗体2与抗原结合(BLI) Table 3 抗体与抗原亲和力结果 Sample ID KD (M) Kon (1/Ms) Koff (1/s) R2 Ab 1 3.11x10-10 2.16x105 6.71x10-5 0.99 Ab 2 2.42x10-9 1.15x105 2.78x10-4 0.99 13. 蛋白水平亲和阻断评价 Fig. 17 展示了采用ELISA技术分析全长抗体与抗原结合活性的一个案例:先导抗体1与抗原的结合活性相比于对照抗体提高了54.97%,先导抗体2无活性,可筛选先导抗体1 作后续功能研究。 Fig. 18 展示了采用ELISA技术分析全长抗体阻断受配体结合能力的一个案例:先导抗体与对照抗体的阻断能力相当,先导抗体2无阻断能力,从而可以选择先导抗体1 进行功能研究。 Fig. 17 全长抗体结合活性分析(ELISA) Fig. 18 全长抗体阻断能力分析(ELISA) 14. 宿主细胞DNA残留检测 利用荧光探针PCR技术,对抗体药中的CHO宿主细胞DNA进行残留检测。Fig. 19 展示了对一个抗体药物进行宿主DNA残留检测的案例,结果显示,该抗体药CHO宿主DNA残留量为:5.9 pg/mg,提取回收率为83.53%,符合国家标准。 Fig. 19 HCD检测标准曲线 15. 宿主细胞蛋白残留检测 基于ELISA技术,采用宿主细胞蛋白残留检测试剂盒,可对抗体药中的宿主细胞蛋白残留量进行检测。Fig. 20 展示了抗体药物进行宿主蛋白残留检测的一个案例,结果显示,该抗体药宿主蛋白残留量为:5.31 ng/mg,加标回收率为90.18%,符合国家标准。 Fig. 20 宿主蛋白残留检测标准曲线 16. Protein A残留检测 基于ELISA技术,采用蛋白质A残留检测试剂盒,可对抗体药中的蛋白质A残留量进行检测。 Fig. 21 展示了对一个抗体药物进行Protein A残留检测的案例,结果显示,该抗体药Protein A残留量为: 0.0001%,符合国家标准。 Fig. 21 Protein A残留检测标准曲线

服务内容

检测类别

检测内容

检测方法

客户提供

交付物

周期

浓度、含量及纯度鉴定

蛋白浓度

ProA-HPLC、UV280

样品

实验报告

1-2 天

浓度、含量及纯度鉴定

蛋白纯度

SDS-PAGE、SEC、CE-SDS

样品

实验报告

1-2 天

浓度、含量及纯度鉴定

蛋白电荷异构体

CEX、iCIEF

样品

实验报告

3-7 天

浓度、含量及纯度鉴定

蛋白等电点

iCIEF

样品

实验报告

1-2 天

一级结构分析

蛋白分子量

LC-MS

样品

实验报告

2-4 周

一级结构分析

肽谱分析

LC-MS、MS

样品

实验报告

2-4 周

翻译后修饰

N糖谱分析

LC-MS

样品

实验报告

2-4 周

翻译后修饰

糖基化位点分析

LC-MS、MS

样品

实验报告

2-4 周

翻译后修饰

寡糖链分析

UPLC-FLD、MS

样品

实验报告

2-4 周

翻译后修饰

唾液酸含量

UPLC-FLD

样品

实验报告

2-4 周

翻译后修饰

脱酰胺、氧化、N端环化等

LC-MS、MS

样品

实验报告

2-4 周

高级结构分析

二硫键分析

LC-MS、MS

样品

实验报告

2-4 周

高级结构分析

热稳定性

DSF

样品

实验报告

2-4 周

生物学活性检测

亲和动力学分析

BLI、SPR

样品

实验报告

1-2 周

生物学活性检测

抗体结合分析

ELISA

样品

实验报告

1-2 周

生物学活性检测

抗体阻断分析

ELISA

样品

实验报告

1-2 周

生物学活性检测

抗体结合表位分析

BLI、ELISA

样品

实验报告

1-2 周

杂质检测

Protein A残留检测

ELISA

样品

实验报告

1-2 天

杂质检测

宿主蛋白残留检测

ELISA

样品

实验报告

1-2 天

杂质检测

宿主DNA残留检测

ELISA

样品

实验报告

1-2 天


服务亮点
  • 1. 表征分析,全面多样
    1. 分析表征涵盖浓度、含量、纯度分析、翻译后修饰、一级结构和高级结构、残留检测、活性检测等各个维度。
  • 2. 质量管理,全面严格
    1. 平台建立了全面、严格的质量管理体系,确保分析结果的合规性、真实性、可靠性和可追溯性。
  • 3. 仪器设备,国际先进
    1. 平台拥有国际先进的仪器设备和系统规范化的操作方法,确保表征分析结果准确高、稳定性好。
  • 4. 团队成员,经验丰富
    1. 团队经已完成数百个相关分析项目,拥有丰富的单抗、多抗、融合蛋白等不同类型分子的表征分析经验。

服务特性
1. 多维理化表征分析检测项目种类齐全

三优生物多维理化表征分析平台拥有丰富的检测项目和检测手法,涵盖基础的浓度、含量、纯度分析、一级结构和高级结构、残留检测。

2. 业内领先的仪器平台

三优生物的表征分析平台集成了一系列行业内先进的检测设备,致力于保障精准稳定的表征检测分析结果。

・ ProteinSimple Maurice

・ Waters ACQUITY UPLC-H-Class PLUS

・ Biacore T200

・ ProbeLife Gator

・ Agilent 1260 HPLC

・ ABI 7500 Fast

・ MD SpectraMax iD3

・ MD AquaMax 4000

・ BioHandler NPS9100 workstation



案例展示
1. 浓度测定(Protein A-HPLC)

如Fig. 1所示,通过ProteinA-HPLC法绘制对照抗体IgG1的标准曲线,峰型呈正态分布,峰面积与浓度线性R2为0.995,线性良好,为抗体蛋白浓度测定提供了快速的数据支持。


Fig. 1 对照抗体标准曲线


色谱柱

MAbPac Protein A

规格

4×35 mm

流动相A

50 mM 磷酸盐缓冲液,150 mM 氯化钠,pH 7.4

流动相B

50 mM 磷酸盐缓冲液,150 mM 氯化钠,pH 2.5

流速

2.0 mL/min

进样量

15 µL

温度

25 ℃

检测波长

280 nm

仪器

Agilent HPLC 1260

2. 蛋白含量测定(UV280)

如Table 1所示,通过商品化的BSA确认仪器的系统适用性,再将待测样品利妥昔单抗 (Rituximab) 稀释至紫外分光光度计的吸光度范围进行吸光度值测定 (n=3) 。最后通过浓度与吸光度,稀释倍数和消光系数间的关系 (Con.=A280×DF/ε) 计算得到待测样品的浓度,为蛋白浓度测定提供了准确的数据支持。


Table 1 待测样品的吸光度测定记录

Sample ID

User Name

Date and Time

Comments

Triplicates 280 nm

Avg Abs 280 nm

Sample1

HMM1

3/25/2021   4:41:47 PM

BSA-b

0.675 0.676 0.676

0.676  

Sample2

HMM1

3/25/2021   4:42:30 PM

BSA-c

0.695 0.695 0.695

0.695  

Sample3

HMM1

3/25/2021   4:43:21 PM

BSA-d

0.677 0.678 0.679

0.678  

Sample4

HMM1

3/25/2021   4:52:35 PM

Rituximab-B

0.661 0.661 0.661

0.661  

Sample5

HMM1

3/25/2021   4:53:30 PM

Rituximab-C

0.651 0.650 0.650

0.650  

Sample6

HMM1

3/25/2021   4:54:16 PM

Rituximab-D

0.658 0.658 0.658

0.658  

3. 纯度

3.1. 纯度分析(SDS-PAGE)

如Fig. 2所示,SDS-PAGE能够准确确定分子量大小及主条带纯度,达到纯度分析的目的。


Fig. 2 SDS-PAGE电泳图谱


3.2. 纯度鉴定(CE-SDS)

如Fig. 3、Fig. 4 所示, CE-SDS能够准确定量分子大小分布及主峰纯度, 对抗体的碎片有着更高的分辨率,为抗体蛋白纯度鉴定提供更准确的数据支持。

Fig. 3 非还原 CE-SDS图谱


Fig. 4 还原 CE-SDS图谱


3.3. 纯度分析(SEC-HPLC)

如Fig. 5 所示,SEC可基于溶液中蛋白质的流体动力学尺寸进行分离,能准确分离出Sample1的聚体含量4.21%,单体含量95.79%,达到聚体分析的目的,为抗体蛋白纯度鉴定提供精准的数据支持。


Fig. 5 Sample 1 SEC检测图谱


色谱柱

XBridge   BEH 200Å

规格

SEC 3.5 µm (300×7.8 mm)

流动相

150 mmol/L,PB  pH 7.4

流速

0.8 mL/min

进样量

100 µg

温度

20 ℃

检测波长

280 nm

仪器

Agilent HPLC 1260

4. 电荷异质性

如Fig. 6所示,CEX pH梯度法能准确分离出上市单抗利妥昔的酸性变异体含量13.16%,主成分含量60.56%,碱性变异体含量26.27%,与文献报道一致,为抗体蛋白电荷变异体分析提供精准的数据支持。



Fig. 6 Rituxan CEX图谱

5. 等电点分析

如Fig. 7所示,iCIEF能够准确检测出上市抗体药物曲妥珠的pI值为8.97,与上市抗体药提供的pI值一致,表明此方法稳定可靠,为抗体蛋白pI值分析提供准确的数据支持。


Fig. 7 曲妥珠pI值检测

6. 分子量检测

如Fig. 8所示,LC-MS可获得蛋白多肽类药物A的精确分子量。


Fig. 8 药物A的质谱图


糖型

理论分子量

M+G0F+G0F

148220.0

M+G0F+G1F

148383.0

M+G1F+G1F

148545.0

M+G1F+G2F

148707.0

M+G2F+G2F

148868.0

7. 肽谱分析

如Fig. 9所示,该蛋白样品的单酶切肽谱覆盖率已达98.4%,3种酶切肽谱进行重叠分析, 肽谱覆盖率可达100%,可以准确确认蛋白的氨基酸序列。


Fig. 9  肽段覆盖率

8. 肽图

如Fig. 10及Table 2所示, 质量肽图检查法可获得该蛋白样品的肽段修饰、肽段序列、价态、平均分子量、响应值等氨基酸序列的全部信息。




Fig. 10 Trypsin酶解产物紫外色谱标注图谱


Table 2 Trypsin酶解产物CDR肽段信息(部分)

CDR肽段

肽段序列

保留时间(min)

批号1

批号2

LCDR3(2)

TFGQGTK

14.37

14.35

LCDR1(1)

VTITCR

20.88

20.85

HCDR1(1)

LSCAASGFR

27.36

27.34

HCDR2(1)

APEWVSDINTR

42.93

42.89

9. N-糖型

抗体药物A糖型图谱如Fig. 11所示,糖型种类和相对数量清晰,与文献报道的糖谱一致,表明此方法稳定可靠,可用于产品一致性和稳定性评价。


Fig. 11 荧光检测器(HPLC / FLD)检测的N糖图谱

10. 唾液酸

如Fig. 12 所示该方法可以准确的检测出单抗阿达木中唾液酸 (Neu5Ac,NANA) 类型和含量,保留时间与阳性对照一致,表明此方法稳定可靠。


Fig. 12 唾液酸分析


色谱柱

Waters BEH C18

规格

(2.1 mm×100 mm)1.7 µm

流动相

甲醇:乙腈:水(7:9:84)

流速  

0.25 mL/min

进样量  

3 µL

温度

30 ℃

检测波长  

激发波长373 nm,吸收波长448 nm

仪器

Waters ACQUITY UPLC H-Class

11. Tm值检测

如Fig. 13,Fig. 14所示,DSF能够准确检测出已上市抗体药物A的Tm1值为69.3℃,Tm2值为81.6℃,该组温度与文献报道的Tm值一致,表明此方法稳定可靠。


Fig. 13 药物A的荧光曲线


Fig. 14 药物A的一阶导数曲线

12. 亲和动力学分析

利用BLI技术,可以分析候选抗体与抗原的结合能力,进而评价其成药性。Fig. 15,16展示了抗体与抗原结合活性分析的案例。由图可知,抗体1(Ab1)与抗原的亲和力要比抗体2(Ab2)高一个数量级。



Fig. 15 抗体1与抗原结合(BLI)


Fig. 16 抗体2与抗原结合(BLI)


Table 3 抗体与抗原亲和力结果

Sample ID

KD (M)

Kon (1/Ms)

Koff (1/s)

Ab 1

3.11x10-10

2.16x105

6.71x10-5

0.99

Ab 2

2.42x10-9

1.15x105

2.78x10-4

0.99

13. 蛋白水平亲和阻断评价

Fig. 17展示了采用ELISA技术分析全长抗体与抗原结合活性的一个案例:先导抗体1与抗原的结合活性相比于对照抗体提高了54.97%,先导抗体2无活性,可筛选先导抗体1作后续功能研究。


Fig. 18展示了采用ELISA技术分析全长抗体阻断受配体结合能力的一个案例:先导抗体与对照抗体的阻断能力相当,先导抗体2无阻断能力,从而可以选择先导抗体1进行功能研究。


Fig. 17 全长抗体结合活性分析(ELISA)


Fig. 18 全长抗体阻断活性分析(ELISA)

14. 宿主细胞DNA残留检测

利用荧光探针PCR技术,对抗体药中的CHO宿主细胞DNA进行残留检测。Fig. 19展示了对一个抗体药物进行宿主DNA残留检测的案例,结果显示,该抗体药CHO宿主DNA残留量为:5.9 pg/mg,提取回收率为83.53%,符合国家标准。


Fig. 19 HCD检测标准曲线

15. 宿主细胞蛋白残留检测

基于ELISA技术,采用宿主细胞蛋白残留检测试剂盒,可对抗体药中的宿主细胞蛋白残留量进行检测。Fig. 20展示了抗体药物进行宿主蛋白残留检测的一个案例,结果显示,该抗体药宿主蛋白残留量为:5.31 ng/mg,加标回收率为90.18%,符合国家标准。


Fig. 20 宿主蛋白残留检测标准曲线

16. Protein A残留检测

基于ELISA技术,采用蛋白质A残留检测试剂盒,可对抗体药中的蛋白质A残留量进行检测。


Fig. 21 展示了对一个抗体药物进行Protein A残留检测的案例,结果显示,该抗体药Protein A残留量为:0.0001%,符合国家标准。


Fig. 21 Protein A残留检测标准曲线