服务简介 背景：在鼠源抗体的基础上制备的人源化抗体是抗体药物的主流技术之一。为了克服传统鼠源抗体制备技术（杂交瘤单抗）的制备周期长、筛选工作量大、候选抗体数量少的缺陷，三优隆重推出MIT小鼠重组单抗定制服务。 方法： MIT小鼠重组单抗制备技术（MIT：Magnetic & Immunization & Tandem antibody library）整合了“多样化小鼠免疫、阵列化噬菌体抗体库构建、磁珠高通量筛选、CHO真核细胞重组表达”四种技术，并匹配了全面的理化及生化分析进行筛选。 优势：仅需3-6周（从小鼠免疫结束开始）即可获得特异性好、亲和力高、序列明确并经真核表达验证的鼠单克隆抗体。 案例：自2016年推出该服务以来，截止2021年12月，三优生物通过MIT小鼠重组单抗制备平台已经完成了上百个项目；针对每个靶点，通常可获得40-60个序列独特、特异性好、亲和力经验证的先导抗体克隆。 服务内容 服务名称 服务内容 客户提供 交付物 周期 MIT小鼠重 组单抗定制 1. 小鼠免疫 2. 免疫库构建 3. 高通量筛选 4. 真核表达验证 靶点抗原（按需提供过表达细胞株） 交付物： 1. 数十个先导抗体分子 2. 按需提供抗体小样 交付标准： 1. 抗体亲和力排序 2. 优选分子经亲和 动力学或FACS验证 约3.5 个月 鼠源抗体人源化 1. 人源化设计 2. 真核表达验证 鼠源抗体序列、靶点蛋白和对照抗体、 鉴定用细胞株等 人源化序列、蛋白、 质粒、检测报告 4-6 周 服务亮点 1. 抗体序列明确，减少冗余筛选工作 本服务采用基因工程和噬菌体展示技术，可直接获得抗体的基因序列，减少不必要的筛选工作。 2. 较杂交瘤节省3个月，加快新药研发进程 本服务在建库和筛选环节仅需2个月，和杂交瘤技术的筛选环节相比，时间缩短了近3个月，可极大加速项目研发进程。 3. 交付几十至上百个高亲和力先导抗体分子 本服务采用多组引物阵列式建库方法以及多种类筛库策略，单一靶点可获得数十至上百个候选分子。且所获抗体亲和力更高，通常可达pM级别。 4. 多点多种类免疫，易获种属交叉活性的抗体分子 本服务采用多品系小鼠（多达4种）、多种类免疫方法及多种属免疫原交叉的免疫策略，辅以多种方式的筛选策略，更易获得种属交叉活性的抗体分子。 5. 真核表达，细胞水平验证，保证交付分子成药性 本服务获得的分子会经过真核水平构建表达，对抗体的理化性质以及细胞功能做全面的检测，保证交付的先导抗体具有较好的成药性。 案例展示 1. 先导抗体数量 MIT磁阵列免疫抗体库服务可以获得的抗体克隆数量较多。通过12个靶点对MIT库进行了筛选验证，共获得了637个具有独特序列的抗体克隆，如Fig. 1所示，所得克隆数中位值是55个。 Fig. 1 Antibody number per project 2. 所获抗体亲和力更高 从MIT磁阵列免疫抗体库服务获得的抗体分子亲和力通常可达到pM水平。Fig. 2和Fig. 3中的抗体来自两个不同的项目，由图可知,这两个项目均可获得多个亲和力与对照抗体相当或显著优于对照抗体的分子。Fig. 4显示不同来源单克隆抗体亲和力的比较， MIT免疫库来源的优选抗体克隆（B3, B4和C4）展现出与杂交瘤接近或更高的亲和力。 Fig. 2 Affinity ranking of MIT-056 Fig. 3 Affinity Ranking of MIT-051 Fig. 4 Comparison of affinities (MIT vs Hybridoma) 3. 细胞水平的结合、阻断活性分析 从MIT磁阵列免疫抗体库服务获得的抗体分子大多具有较好的细胞水平活性。Fig. 5展示了采用FACS分析抗体与细胞表面蛋白结合活性的一个案例项目，Fig. 6展示使用FACS分析抗体对受体配体结合的阻断活性的一个案例。由图可知，全部先导抗体分子均展现了优于对照抗体的结合活性和阻断活性。 Fig. 5 Binding affinity determination by FACS Fig. 6 Blocking activity determination by FACS 4. 体外药效验证 从MIT磁阵列免疫抗体库服务获得的抗体分子也可以经受体外药效的验证。在吞噬实验中，通过抗体阻断“别吃我”信号，可以促进巨噬细胞对靶细胞的吞噬。如图Fig. 7所示，通过FACS检测发现，经候选抗体（E4A）处理，巨噬细胞对靶细胞（CCRF-CEM）的吞噬作用显著增强，表明该候选抗体对“别吃我”信号通路有很好的阻断活性。 Fig. 7 Phagocytosis of CCRF-CEM cells by macrophages 5. 体内药效验证 从MIT磁阵列免疫抗体库服务获得的抗体分子也可以经受体内药效的验证。候选分子在NOD/SCID小鼠的CDX模型的体内抗肿瘤药效验证结果如Fig. 8所示。分对照组和治疗组，每周给药三次，连续给药三周。结果显示：候选抗体E4的抗肿瘤效果显著优于对照抗体。 Fig. 8 Tumor growth inhibition 6. 成药性相关参数 MIT磁阵列免疫抗体库服务获得的分子构建全长后，对抗体的表达量，以及抗体的理化特性进行分析。如下表所示，展示了全面的成药性评价体系，包括纯度及浓度测定，一级结构分析和亲和力及亲和动力学等多个维度。 类别 检测内容 检测方法 纯度及浓度测定 纯度鉴定 SDS-PAGE/SEC/CE-SDS 纯度及浓度测定 浓度鉴定 Protein A-HPLC/UV280 一级结构分析 分子量分析 LC/MS 一级结构分析 等电点 iCIEF 一级结构分析 疏水性鉴定 HIC-HPLC 一级结构分析 电荷异质性测定 CEX 一级结构分析 肽图分析 LC-UV-MS/MS 一级结构分析 N糖谱分析 LC/MS 亲和力及亲和动力学 亲和力检测 ELISA 亲和力及亲和动力学 亲和动力学检测 BLI/SPR 亲和力及亲和动力学 细胞结合检测（如有） FACS 7. 代表项目研发进展 项目号 靶点 适应症 项目难点 分子形式 库来源 进展 BC008 CLND18.2 血液瘤/ 实体瘤 多次跨膜蛋白 双抗 小鼠+羊驼免疫库 IND中 未披露 ROR1 实体瘤、 血液瘤 跨膜受体酪 氨酸激酶 ADC 小鼠+羊驼免疫库 pre-IND 未披露 BCMA 血液瘤 内吞活性 ADC 小鼠免疫库 pre-IND LK001 NKG2A 头颈癌 人猴种属仅 1个AA差异 单抗/双抗/三抗 小鼠+羊驼免疫库 体外药效 未披露 4-1BB 实体瘤 4-1BB毒性 单抗/双抗/三抗 免疫库+人源库 双抗体内验证 MY001 C100 实体瘤 种属交叉并 阻断3种受配体 单抗/双抗/三抗 免疫库+人源库 体内药效 YL001 CTGF 胰腺癌 生长因子 全长抗体 小鼠免疫库 体内药效 GY001 PD-1 实体瘤 免疫抑制分子 双抗 小鼠库+羊驼免疫库 体内药效 未披露 OX40 实体瘤 共刺激靶点 单抗/双抗/三抗 小鼠免疫库 药效评价