菜单
服务简介

背景:噬菌体展示技术是全人抗体开发的重要途径,在很多方面均展示出了杂交瘤抗体技术难以比拟的优点。市场上人源噬菌体展示抗体库普遍存在供体少、库容低、多样性低、亲和力低、成药性低等问题。为获得数量更多,质量更优的候选抗体,超万亿全人抗体库子库筛选服务。


方法:该库基于百亿级全人源抗体库,通过精细化操作及分子区块建库进行多轮重组从而构建出了库容达到千亿级的“人源重组抗体库”。


优势:可获得数百个高亲和力的先导抗体,所获抗体的亲和力、特异性、类别丰富度等指标均居国际领先水平。


案例:三优生物通过超万亿全人抗体库子库已完成数十个项目筛选验证;针对不同的靶点,平均可获得286个序列独特、亲和力较好的先导抗体分子。


Fig. 1 不同难度靶点的先导分子数统计

服务简介 背景:噬菌体展示技术是全人抗体开发的重要途径,在很多方面均展示出了杂交瘤抗体技术难以比拟的优点。市场上人源噬菌体展示抗体库普遍存在供体少、库容低、多样性低、亲和力低、成药性低等问题。为获得数量更多,质量更优的候选抗体,超万亿全人抗体库子库筛选服务。 方法:该库基于百亿级全人源抗体库,通过精细化操作及分子区块建库进行多轮重组从而构建出了库容达到千亿级的“人源重组抗体库”。 优势:可获得数百个高亲和力的先导抗体,所获抗体的亲和力、特异性、类别丰富度等指标均居国际领先水平。 案例:三优生物通过超万亿全人抗体库子库已完成数十个项目筛选验证;针对不同的靶点,平均可获得286个序列独特、亲和力较好的先导抗体分子。 Fig. 1 不同难度靶点的先导分子数统计 服务内容 服务名称 服务详情 客户提供 交付物 周期 超万亿全人抗体库子库筛选服务 1. 高通量筛选 2. 真核表达验证 靶点抗原或细胞株 1. 100个序列特异的先导分子 2. 先导分子抗体制备及验证 3. 优选分子抗体制备及验证 6-8 周 可选服务 MIT小鼠重组单抗定制 | 亲和力成熟 服务亮点 1. 抗体序列明确,直接获得人源抗体 该服务采用基因工程和噬菌体展示技术,可直接筛选得到人重组抗体基因序列,减少不必要的筛选工作。 2. 千亿抗体库容,抗体分子多样性高 超万亿全人抗体库子库库容高达1.55×1011 cfu,巨大的样本数量确保了抗体的多样性,为后期研发奠定基础。 3. 高通量集成化,筛选效率大幅提高 采用固相和液相一站式高通量自动化筛选,极大的缩短了筛选时间,并且提高了筛选通量,筛选效率大幅提高。 4. 抗体数量较多,可达数百先导分子 历经数十个靶点的验证,采用蛋白-蛋白,蛋白-细胞,细胞-细胞多种筛选方式,每个靶点平均可获得数百个先导抗体分子。 5. 真核细胞表达,全长水平活性验证 采用哺乳动物细胞表达系统,表达重组蛋白接近天然构象,具有良好的生物学活性,辅以多维质控,抗体质量全面验证。 服务特性 1. 种系基因分布特性 三优超万亿全人抗体库种系基因覆盖较全,全人重组抗体库轻链亚型分为κ和λ两种,分析两种亚型轻链种系基因分布比例及重链种系基因分布比例,分布特性符合抗体药物种系基因分布规律。 2. 抗体多样性高 抗体的CDR-L3和CDR-H3的长度分布是评估抗体多样性的一个指标。从构建好的文库中挑取数百个克隆,进行测序、分析,CDR-L3的长度范围为6-13个氨基酸,CDR-H3的长度范围为5-28个氨基酸,与文献报道一致,多样性极高,且呈正态分布。 Fig. 1 Comparise of CDR-L3 length distrition frequency Fig. 2 Comparise of CDR-H3 length distrition frequency 3. 先导抗体数量多 从三优超万亿全人抗体库子库筛出的先导分子可达数百。如Fig. 3所示,通过对10个靶点筛选验证,共获得了1335个具有独特序列的抗体克隆,平均可获得数百个独特序列的克隆,其中90%以上的项目获得100多个克隆。 Fig. 3 Statistics of Binder amount/project 4. 全面成药性分析 超万亿全人抗体库子筛选服务获得的分子构建全长后,对抗体的表达量及抗体的生化理化特性进行全面分析。如Table. 1 所示,包括纯度及浓度测定、一级结构分析和亲和力及亲和动力学等多个维度。 Table 1 Drug developability of antibodies from ST-hRAL 类别 检测内容 检测方法 纯度及浓度测定 纯度鉴定 SDS-PAGE/SEC/CE-SDS 纯度及浓度测定 浓度鉴定 Protein A-HPLC/UV280 一级结构分析 分子量分析 LC/MS 一级结构分析 等电点 iCIEF 一级结构分析 疏水性鉴定 HIC-HPLC 一级结构分析 电荷异质性测定 CEX 一级结构分析 肽图分析 LC-UV-MS/MS 一级结构分析 N糖谱分析 LC/MS 亲和力及亲和动力学 亲和力检测 ELISA 亲和力及亲和动力学 亲和动力学检测 BLI/SPR 亲和力及亲和动力学 细胞结合检测(如有) FACS 5. 先导抗体亲和力高 从三优超万亿全人抗体库子库筛出的分子都具有较好的亲和活性。所获得抗体的亲和力往往可以达到nM至sub-nM之间。Fig. 4为表达上清后的分子亲和力分析,结果显示大部分抗体克隆都有较好的亲和力。 Fig. 4 Kinetics determination by ForteBio 案例展示 1. 抗CD40全人抗体的开发 背景:CD40与DC细胞表面的结合促进了细胞因子和趋化因子的产生,诱导共刺激分子的表达,并促进抗原的交叉呈递。CD40L的主要功能之一是通过激活DC细胞来增强抗原对T细胞的提呈,通过上调表面蛋白如CD54和CD86,增加DC与T细胞的相互作用,从而激活后者。 1.1. 临床竞争格局 截至目前,全球有20多种CD40抗体药物正在用于针对肿瘤及免疫系统疾病的临床试验,大多处于早期研究阶段。 1.2. 单克隆抗体MOA 激动性抗CD40单抗能够通过激活树突状细胞(DC)来增强T细胞反应的启动能力。因此,抗CD40抗体可将“冷肿瘤”变成“热肿瘤”,抗CD40抗体通过修饰肿瘤中的免疫抑制性髓细胞浸润而使肿瘤对免疫反应的容忍度更高。 2. CD40抗体关键结果 2.1. 细胞水平的结合、阻断及激活活性分析 构建的全长分子在细胞水平进行结合、阻断和激活实验,Fig. 5展示了采用FACS分析抗体与细胞表面蛋白结合活性的数据,Fig. 6展示了基于FACS分析抗体对受体配体结合的阻断及激活活性的一个案例项目。由图可知,全部先导抗体克隆均展现了良好的细胞水平的结合活性;14个抗体中,有8个抗体展现了良好的激活活性,有5个抗体展现了和对照抗体相似的阻断活性。 Fig. 5 Binding affinity determination by FACS Fig. 6 Blocking activity determination by FACS 2.2. 体外药效验证 CD40与CD40L的结合会激活DC细胞,促进IL-12与CD83的分泌,激动型anti-CD40 mAb与CD40的结合也会激活DC细胞。候选分子的iDC细胞激活实验结果如图Fig. 7所示,H9的促IL12分泌活性和促CD83分泌活性显著优于对照抗体,显示其优异的DC细胞激活活性。 CD40与CD40L的结合会激活DC细胞,促进IL-12与CD83的分泌,激动型anti-CD40 mAb与CD40的结合也会激活DC细胞。候选分子的iDC细胞激活实验结果如图Fig. 7所示,H9的促IL12分泌活性和促CD83分泌活性显著优于对照抗体,显示其优异的DC细胞激活活性。 Fig. 7 iDC activation assay 2.3. 体内药效验证 全人源候选分子H9在Nude小鼠CDX模型的体内抗肿瘤药效验证结果如Fig. 8所示。分对照组和治疗组,每周给药三次,连续给药两周。结果显示:在1 mpk剂量时,候选抗体H9的抑瘤效果优于对照抗体;在5 mpk剂量时,候选抗体的抑瘤效果与对照抗体相当,均可完全抑制肿瘤生长。 Fig. 8 Tumor growth inhibition 代表项目研发进展

服务内容

服务名称

服务详情

客户提供

交付物

周期

超万亿全人抗体库子库筛选服务

1. 高通量筛选
2. 真核表达验证


  1. 靶点抗原或细胞株


1. 100个序列特异的先导分子
2. 先导分子抗体制备及验证
3. 优选分子抗体制备及验证

6-8 周


可选服务

MIT小鼠重组单抗定制 | 亲和力成熟


服务亮点
  • 1. 抗体序列明确,直接获得人源抗体
    1. 该服务采用基因工程和噬菌体展示技术,可直接筛选得到人重组抗体基因序列,减少不必要的筛选工作。
  • 2. 千亿抗体库容,抗体分子多样性高
    1. 超万亿全人抗体库子库库容高达1.55×1011 cfu,巨大的样本数量确保了抗体的多样性,为后期研发奠定基础。
  • 3. 高通量集成化,筛选效率大幅提高
    1. 采用固相和液相一站式高通量自动化筛选,极大的缩短了筛选时间,并且提高了筛选通量,筛选效率大幅提高。
  • 4. 抗体数量较多,可达数百先导分子
    1. 历经数十个靶点的验证,采用蛋白-蛋白,蛋白-细胞,细胞-细胞多种筛选方式,每个靶点平均可获得数百个先导抗体分子。
  • 5. 真核细胞表达,全长水平活性验证
    1. 采用哺乳动物细胞表达系统,表达重组蛋白接近天然构象,具有良好的生物学活性,辅以多维质控,抗体质量全面验证。

服务特性
1. 种系基因分布特性

三优超万亿全人抗体库种系基因覆盖较全,全人重组抗体库轻链亚型分为κ和λ两种,分析两种亚型轻链种系基因分布比例及重链种系基因分布比例,分布特性符合抗体药物种系基因分布规律。

2. 抗体多样性高

抗体的CDR-L3和CDR-H3的长度分布是评估抗体多样性的一个指标。从构建好的文库中挑取数百个克隆,进行测序、分析,CDR-L3的长度范围为6-13个氨基酸,CDR-H3的长度范围为5-28个氨基酸,与文献报道一致,多样性极高,且呈正态分布。


Fig. 1 Comparise of CDR-L3 length distrition frequency


Fig. 2  Comparise of CDR-H3 length distrition frequency

3. 先导抗体数量多

从三优超万亿全人抗体库子库筛出的先导分子可达数百。如Fig. 3所示,通过对10个靶点筛选验证,共获得了1335个具有独特序列的抗体克隆,平均可获得数百个独特序列的克隆,其中90%以上的项目获得100多个克隆。


Fig. 3 Statistics of Binder amount/project

4. 全面成药性分析

超万亿全人抗体库子筛选服务获得的分子构建全长后,对抗体的表达量及抗体的生化理化特性进行全面分析。如Table. 1 所示,包括纯度及浓度测定、一级结构分析和亲和力及亲和动力学等多个维度。


Table 1 Drug developability of antibodies from ST-hRAL

类别

检测内容

检测方法

纯度及浓度测定

纯度鉴定

SDS-PAGE/SEC/CE-SDS

纯度及浓度测定

浓度鉴定

Protein A-HPLC/UV280

一级结构分析

分子量分析

LC/MS

一级结构分析

等电点

iCIEF

一级结构分析

疏水性鉴定

HIC-HPLC

一级结构分析

电荷异质性测定

CEX

一级结构分析

肽图分析

LC-UV-MS/MS

一级结构分析

N糖谱分析

LC/MS

亲和力及亲和动力学

亲和力检测

ELISA

亲和力及亲和动力学

亲和动力学检测

BLI/SPR

亲和力及亲和动力学

细胞结合检测(如有)

FACS

5. 先导抗体亲和力高

从三优超万亿全人抗体库子库筛出的分子都具有较好的亲和活性。所获得抗体的亲和力往往可以达到nM至sub-nM之间。Fig. 4为表达上清后的分子亲和力分析,结果显示大部分抗体克隆都有较好的亲和力。


Fig. 4 Kinetics determination by ForteBio


案例展示
1. 抗CD40全人抗体的开发

背景:CD40与DC细胞表面的结合促进了细胞因子和趋化因子的产生,诱导共刺激分子的表达,并促进抗原的交叉呈递。CD40L的主要功能之一是通过激活DC细胞来增强抗原对T细胞的提呈,通过上调表面蛋白如CD54和CD86,增加DC与T细胞的相互作用,从而激活后者。


1.1. 临床竞争格局

截至目前,全球有20多种CD40抗体药物正在用于针对肿瘤及免疫系统疾病的临床试验,大多处于早期研究阶段。


1.2. 单克隆抗体MOA

激动性抗CD40单抗能够通过激活树突状细胞(DC)来增强T细胞反应的启动能力。因此,抗CD40抗体可将“冷肿瘤”变成“热肿瘤”,抗CD40抗体通过修饰肿瘤中的免疫抑制性髓细胞浸润而使肿瘤对免疫反应的容忍度更高。

2. CD40抗体关键结果

2.1. 细胞水平的结合、阻断及激活活性分析

构建的全长分子在细胞水平进行结合、阻断和激活实验,Fig. 5展示了采用FACS分析抗体与细胞表面蛋白结合活性的数据,Fig. 6展示了基于FACS分析抗体对受体配体结合的阻断及激活活性的一个案例项目。由图可知,全部先导抗体克隆均展现了良好的细胞水平的结合活性;14个抗体中,有8个抗体展现了良好的激活活性,有5个抗体展现了和对照抗体相似的阻断活性。


Fig. 5 Binding affinity determination by FACS


Fig. 6 Blocking activity determination by FACS


2.2. 体外药效验证

CD40与CD40L的结合会激活DC细胞,促进IL-12与CD83的分泌,激动型anti-CD40 mAb与CD40的结合也会激活DC细胞。候选分子的iDC细胞激活实验结果如图Fig. 7所示,H9的促IL12分泌活性和促CD83分泌活性显著优于对照抗体,显示其优异的DC细胞激活活性。


CD40与CD40L的结合会激活DC细胞,促进IL-12与CD83的分泌,激动型anti-CD40 mAb与CD40的结合也会激活DC细胞。候选分子的iDC细胞激活实验结果如图Fig. 7所示,H9的促IL12分泌活性和促CD83分泌活性显著优于对照抗体,显示其优异的DC细胞激活活性。



Fig. 7 iDC activation assay


2.3. 体内药效验证

全人源候选分子H9在Nude小鼠CDX模型的体内抗肿瘤药效验证结果如Fig. 8所示。分对照组和治疗组,每周给药三次,连续给药两周。结果显示:在1 mpk剂量时,候选抗体H9的抑瘤效果优于对照抗体;在5 mpk剂量时,候选抗体的抑瘤效果与对照抗体相当,均可完全抑制肿瘤生长。


Fig. 8 Tumor growth inhibition


代表项目研发进展